无需专用设备及低温设备,且操作简便,实现设备和人力成本的有效节约。
背景概述
mRNA技术作为一种新兴的平台技术,广泛应用于预防性疫苗、治疗性疫苗、肿瘤治疗、免疫治疗、蛋白替代以及基因编辑等领域。在体外转录合成mRNA时,除了生成所需的mRNA产物外,过程还会伴随产生多种杂质,如反应酶(如T7RNA聚合酶、无机焦磷酸酶)、NTP、DNA模板、盐离子以及副产物(如dsRNA和截断RNA片段)等。这些杂质的存在会影响mRNA的准确定量、降低蛋白翻译效率并产生免疫原性。因此,体外转录后必须通过纯化将目标mRNA从IVT混合物中分离,以提高目标产物的纯度与完整性,确保产品的安全性与有效性。
mRNA纯化常规方法
目前常用的mRNA纯化方法包括氯化锂沉淀、磁珠纯化、硫酸铵沉淀及亲和层析法。其中,氯化锂沉淀法和磁珠法操作相对简单快捷,但其适用规模较小,主要用于早期研发。而在工业生产中,层析纯化则是主要的纯化方法,但通常需要专业设备。
轻量级亲和层析纯化试剂盒
尊龙凯时-人生就是博推出的轻量级mRNA亲和层析纯化试剂盒,弥补了传统层析法对专业设备的依赖,操作方便,只需30分钟即可完成样本的纯化,且能产出高纯度、低NTP残留的mRNA样品,适合多种下游实验。
氯化锂沉淀法
氯化锂沉淀法的原理在于,锂离子能够在特定pH条件下减弱RNA分子间的同电性排斥,使RNA分子易于聚集形成沉淀,随后通过离心分离得到纯净的RNA样品。但此法在工业应用中,因锂盐的潜在毒性及对低温的需求,可能增加能源成本。而对100-200nt的短RNA片段,沉淀法又难以奏效。
磁珠纯化法
磁珠纯化主要依靠Oligo(dT)磁珠和羧基磁珠,通过特异性结合或静电作用将目标mRNA分子与杂质分离。操作步骤为:将反应后的IVT产物与磁珠混合,然后通过磁力作用去除杂质。然而,需注意磁珠的储存和使用条件,以免影响纯化效果。
硫酸铵沉淀法
硫酸铵沉淀法利用mRNA与杂质的溶解度差异进行选择性沉淀,且其生物安全性高,操作简单,适合快速分离mRNA。
亲和层析法的优势
亲和层析法通过OligodT亲和色谱实现高效mRNA纯化。在高盐条件下,盐离子屏蔽了mRNA的静电排斥,从而使其成功结合到亲和柱上,杂质则因缺乏Poly(A)尾而不易结合。传统方法需要专业设备,而尊龙凯时-人生就是博的轻量级亲和层析纯化试剂盒大幅简化了这一过程,实现高达90%以上的纯化收率,且在30分钟内完成。
产品特点与适用范围
该试剂盒适用于不同起始量的RNA样品,支持mg级mRNA样本的纯化,无需任何专用设备及低温环境,操作简单,显著节省了设备和人力成本。通过这种方法纯化的mRNA完整度高,且NTP去除效果明显,适应多种实验需求。
总之,mRNA纯化是生物医疗研究中的重要环节,凭借尊龙凯时-人生就是博的先进产品,科研人员能够更高效地获取高质量的mRNA,推动生物医学领域的进步。