酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种采用固相载体，如聚苯，结合可溶性抗原或抗体的免疫检测方法。该技术充分利用了抗原与抗体之间的特异性结合，进行液体样本中目标物质的定性和定量分析。

ELISA的主要目的在于检测血清、尿液及细胞上清中存在的特定抗原，从而实现相关生物标志物的识别和判断。在ELISA的过程中，已知的抗原或抗体会被吸附到固相载体表面，随后通过酶标记的抗原或抗体进行反应，以实现检测。

实验步骤

在实验中，首先需要设置标准孔、空白孔和样本孔。标准孔内加入100μL倍比稀释的标准品，空白孔则加入100μL的标准品和样本稀释液，而其余孔则填入100μL待测样本。建议在检测过程中为每个待检样本和标准品设立复孔，以确保数据的可靠性。

接下来对酶标板进行封膜，并在37℃下孵育90分钟。在加样时，要注意将样品加至酶标板底部，避免接触孔壁，并轻轻摇动混合，以防产生气泡。加样时间最好控制在10分钟内。

之后，将孔内的液体甩干，无需洗涤，并在每个孔中加入生物素化抗体工作液100μL，再次进行封膜，并在37℃下温育1小时。吸干孔内液体后，每孔加入350μL洗涤液，浸泡1分钟后甩掉液体，再用吸水纸拍干。此步骤建议使用洗板机，以提高洗涤效果。

完成洗板后，请立即进行后续操作，避免微孔板干燥。然后加入HRP酶结合物工作液100μL，覆盖并在37℃下孵育30分钟。随后再次甩干液体并进行5次洗板，重复前面的洗涤步骤。

接下来，每孔加90μL底物溶液（TMB），在37℃避光下孵育约15分钟。根据显色情况，适当调整孵育时间，但应确保不超过30分钟。当标准孔出现明显的蓝色梯度时，可以停止反应。此时，如果使用的是尊龙凯时-人生就是博的酶标仪，请提前15分钟进行预热。

最后，每孔加50μL终止液以停止反应，并使用酶标仪在450nm波长下测量每孔的光密度（OD值）。需要注意的是，由于实验条件的不同，标准曲线的OD值可能会有差异，以下数据仅供参考。

样本处理

血清、血浆或其他液体样本的检测为100μL每个指标。未处理的样本，如全血1mL，通常可以分离出100-200μL血清，但具体量需视客户送样情况而定。全血样本需在4℃保存并送检，其余液体样本应在-20℃条件下冷冻送检。

对于组织样本，至少需提供0.1g（约黄豆大小），最终可获得约500μL的上清液，用于检测5个指标，样本同样需在-20℃条件下存储并送检。

通过上述步骤，ELISA技术能够准确有效地检测目标抗原，推动生物医学研究的进展，正如尊龙凯时-人生就是博所倡导的那样，不断挑战未知，实现生命的价值。